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    橡树疫霉菌的快速检测

      本实验室应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的橡树疫霉菌的检测方法。以ITS为靶序列对橡树疫霉的分子检测存在无法区分近似种的问题。在橡树疫霉的基因组的研究中,本研究发现了PrA3aPro类转座子序列。生物信息学分析表明,该序列非常适合作为大豆疫霉分子检测的靶标。利用LAMP技术,以PrA3aPro为靶序列,设计LAMP 特异性引物,建立LAMP反应体系与条件,并进行灵敏度和特异性实验。结果表明整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测实验结果。在等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,反应后经3种方法验证扩增结果,(1):浊度仪验证浊度变化;(2):琼脂糖凝胶进行电泳验证;(3):在扩增前加入染料 HNB (羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化判定。在特异性实验中,橡树疫霉菌株中能够产生浊度曲线、扩增到梯形状的条带,同时HNB显色观察到天蓝色的阳性反应,而从其它疫霉、腐霉和真菌供试菌株中均没有观察到这些现象。在灵敏度试验中,PrA3aPro-LAMP技术最低检测限为 1 ng.µL-1。该方法的建立为橡树疫霉的检疫和所致病害的快速诊断提供了新的技术。文章《基于环介导等温扩增技术检测橡树疫霉》已经被南京农业大学学报接受。

    发布时间: 2012-09-14 18:17 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
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