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  • 聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳

      

    (一)电泳贮备液

         1号液:1N HCl 48ml,三羟甲基氨基甲烷(Tris)36.6g,四甲基乙二胺(TEMED)0.5ml,用蒸馏水定容至100ml,pH8.9。

         2号液:1N HCl 48ml,三羟甲基氨基甲烷(Tris)5.98g,四甲基乙二胺(TEMED)0.7ml,用蒸馏水定容至100ml,pH6.7。

         3号液:丙烯酰胺28.0g,N·N`亚甲基双丙烯酰胺0.735g,用蒸馏水定容至100ml。

         4号液:丙烯酰胺10.0g,N·N`亚甲基双丙烯酰胺0.25g,用蒸馏水定容至100ml。

         5号液:过硫酸铵0.14g,用蒸馏水定容至100ml。

        上述1、2、3、4号液配制后盛于棕色瓶中于4°C下保存,可贮藏1~2个月,但5号液配置后冷藏时间不超过一星期。

         电极缓冲液:三羟甲基氨基甲烷6.0g,甘氨酸28.8g,用蒸馏水定容至100ml,使用前稀释10倍。

    (二)制胶      取1、3、蒸馏水和5号液按2:4:8:8的比例混合,加入垂直电泳槽制成分离胶。待分离胶凝固后,取2、4、蒸馏水和5号液按1:2:1:4比例混合,在电泳槽上插入加样梳,灌入浓缩胶。待浓缩胶凝固后,拔出加样梳,并吸去加样孔中多余的水分。

    (三)电泳      用微量加样器在各加样孔中加入电泳样品,每孔的蛋白质加样量为100ug左右。在电泳槽中加入电极缓冲液并滴加2滴1%溴酚兰指示剂沿线,电泳。开始时电流强度用30mA,待样品进入分离胶时调至50mA。电泳过程中,将电泳槽置4°C冰箱中进行。

     

     


    发布时间: 2009-05-27 15:45 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
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