站内搜索:  

  网站首页           关于我们            新闻动态            疫 霉 菌            疫病控制            文献中心            研究成果            用户登录  
 
 

研究单位

  • 安徽农业大学
  • 国家大豆改良中心
  • 河北大学
  • 河北农业科学院植保所
  • 黑龙江农业大学
  • 黑龙江农业科学院植保所
  • 南京农业大学植物病理系
  • 西北农业大学
  • 云南农业科学院植保所
  • 云南师范大学
  • 中国农业科学院作物所
  • 安徽农业科学院作物所
  • 东北农业大学


  • 卵孢子的细胞核染色

      
    由于卵孢子具有厚壁,因此卵孢子的细胞核染色和观察较困难。这里介绍较常用的乙酸地衣红染色法。
    滴一滴卵孢子悬浮液于载玻片上,自然风干使卵孢子附着于玻片上。将玻片浸入酸性乙醇溶液(乙醇与冰醋酸按3:1混合)中45分钟,再在乙醇一醚溶液(无水乙醇与石油醚按1:1混合)中浸⒛ 小时,70%乙醇30分钟,1%柠檬酸10分钟,60%乙酸1小时,最后用乙酸地衣红染液染4~6小时。染色结束后,在卵孢子样本上再滴加1滴乙酸地衣红染液,盖上盖玻片,用指甲油封固,36小时后在普通显微镜下观察。细胞核呈浅玫瑰色至暗红色,直径4~8um。
    乙酸地衣红染液配制:在煮沸的60%乙酸中加入地衣红,直至地衣红过量,在底部出现地衣红沉淀。待冷却后,染液经双层普通滤纸过滤,滤过液与60%乙酸按1:2(V/V)混合,即制备成乙酸地衣红染液。
    为获得纯净的卵孢子以便于染色和观察,最好在液体培养条件下产生卵孢子。对同宗配合疫霉菌,单株接种于液体培养基中即可以产生大量卵孢子;对于异宗配合疫霉菌,可将Al和A2菌株同时接种于培养液中相互诱导产生卵孢子。为提纯卵孢子,用匀浆机将带有卵孢子的菌丝丛打成片段(4000转/分,匀浆2~3分钟)。卵孢了一菌丝悬浮液用1%glusulase(葡糖苷酸酶和芳基硫酸酯酶混合物)在摇床上(100转/分)振荡18小时(28°C)。处理过的悬浮液经离心(5000转/分,1分钟),倾去上清液。沉淀物用灭菌蒸馏水重新悬浮,再离心。如此重复数次,最后收集离心管底部的卵孢子,制成纯净的卵孢子悬浮液,供细胞核染色用。

    发布时间: 2009-05-11 19:30 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
      南京农业大学植物保护学院植物病理系 江苏省南京市卫岗1号 邮编:210095
    Tel: 025-84399071 phytophthora@njau.edu.cn
     
      作物疫病信息平台- 建议最佳分辨率1024*768 Copyright © 2007-2008