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  • 无性结构细胞核染色

      
    (一)丫啶橙染色法 将1滴游动孢子悬浮液与0.0025%丫啶橙染液于载玻片上混合,用热风机将水滴吹干,再滴加1滴丫啶橙染液,盖上盖玻片,用指甲油封固,在荧光显微镜下观察。疫霉菌的细胞核发亮、黄绿色、球形、椭圆形或不规则形,背景呈浅暗绿色或桔红色。
    0.0025%丫啶橙染液:丫啶橙2mg 佛罗那醋酸缓冲液100ml
    佛罗那醋酸缓冲液(Veronal acetate buffer)的配制方法如下:
    佛罗那醋酸溶液[醋酸钠0.971g,可溶性佛罗那(Sodium dlethylbalbitumte)1.471g,去离子水50rul]50m1     0.01MHCl   74ml    去离子水100ml     pH8.65。
    该染色方法简单,快速,但需要有荧光显微镜设备。荧光显微镜采用BG38号激发器滤光片,栅栏滤光片采用53号和47号或65号和50号。该方法适用于游动孢子、菌丝、孢子囊、菌丝膨大体、厚垣孢子的细胞核染色。对游动孢子,在它们形成休止孢之前染色,可以更清楚地观察到它们的细胞核。
    (二)苏木精染色法 将菌丝及孢子悬浮液滴于干净载玻片上,自然风干,使菌丝和孢子附着在玻片表面。玻片浸入布安氏固定液(苦昧酸饱和溶液75ml,福尔马林23ml,冰醋酸2mD中固定1小时,用蒸馏水缓缓冲洗数次。玻片置于加热板上(40°C)干燥10小时,用蒸馏水缓缓冲洗1分钟。玻片浸入铁矾媒染液(4%铁矾水溶液100ml,冰醋酸1ml,硫酸0.12ml)中媒染10小时,用蒸馏水冲去多余染液,在0.5%海登氏苏木精染液中染色10小时,蒸馏水冲洗数次。用序列浓度的酒精脱色,酒精浓度及顺序为50%→ 75%→ 95%→100%。用0.25%酒精橙G  (橙G 0.25g,无水酒精100ml)复染5分钟,在无水酒精中漂洗2次。在显微镜下边滴加褪色剂(乳酚油与甘油按2:1混合)边观察至细胞核清晰可见为止。滴加甘油洗去褪色剂,封片,观察
    0.5%海登氏苏木精染色液:
    苏木精0.5g 96%酒精5ml   蒸馏水95ml    碘化钠0.05g。
    混合后加热至40°C,用普通滤纸过滤,滤过液置一星期(待染液呈红色时)方可使用。

    发布时间: 2009-05-11 19:29 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
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