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  • 培养基平板上萌发测定

      
    将卵孢子悬浮液(制各方法参见本章第九节)经离心(2000转/分)5分钟,倾去上清液,收集离心管底部的卵孢子,置于4层滤纸片(大小约2× 20cm)上吸去多余的水。将上层滤纸片连同上面的卵孢子包于双层玻璃纸中,埋入盛有灭菌土或无病自然土的圆钵(高20cm,直径15cm)中,埋深5~15cm。将圆钵埋入网室土壤中,钵面与地面平齐。往圆钵内浇1次水,以后不再另外人工补充水分。经过一定时期后,刨去上层土壤,收集经埋存的玻璃纸包。用剪刀将玻璃纸包剪成碎片,悬浮于20ml灭菌水中充分搅拌,使卵孢子脱落。用镊子夹出玻璃纸碎片,悬浮液经400目和600目筛网过滤,用1000ml蒸馏水冲洗400目和600目筛网。用少量无菌水洗下600目筛网上收集到的卵孢子。卵孢子用0.2%KMnO4溶液处理20分钟,经600目筛网过滤,用1000ml蒸馏冲洗600目筛网后,用少量灭菌水重新悬浮处理过的卵孢子。卵孢子涂布于S+L培养基培养基上,在光照条件下诱导萌发并计算萌发率
    包有卵孢子的玻璃纸较长时间地埋存于土壤中,以纤维素为主要成分的玻璃纸会被土壤微生物部分分解。因此,当埋存时间较长,如几个月以上,玻璃纸包可能破碎。但小心收集土壤中的玻璃纸和滤纸残片,仍可以回收到较大量的卵孢子。在显微镜下观察回收的卵孢子,其雄器大多已消失,藏卵器壁松散变形并与卵孢子壁脱离,藏卵器柄残存,部分卵孢子已无藏卵器包被。
    这一方法的主要优点是,可以直接测定出卵孢子在土壤中经一定时期埋存后仍然可以萌发的比率,其结果直接、可靠。但是,由于土壤中的卵孢子是陆续解除休眠的,而且诱导萌发不一定是在卵孢子的最佳保存期内进行,因此所获得的萌发率可能比卵孢子的实际存活率要低一些。

    发布时间: 2009-05-11 19:25 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
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