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  • 单卵孢株群体的建立

      
    将培养皿盖打开,置于100倍显微镜下直接观察。用解剖刀切下含有单个已萌发卵孢子的S+L培养基小块(大小约2~4mm2),移至适于其生长的培养基上。培养基中加入青霉素、利福平、五氯硝基苯各50ug/ml,以防单孢分离过程中有杂菌污染。培养皿在适温下、黑暗中培养直至长出菌落。所获得的菌株即为单卵孢株。
    单卵孢子(株)分离通常在卵孢子悬浮液涂布在S+L培养基平板上后第3天开始,以后每隔2天左右进行一次单孢分离。在S+L培养基上,有少数卵孢子在涂布后20小时内开始萌发,至72小时可形成内眼隐约可见的小菌落,应立即做单孢分离移出,否则几天后在培养基上形成较大的菌落,会影响随后其他萌发单卵孢子的分离。大多数萌发的卵孢子经单孢分离移出后,在合适的培养基上培养2~3天就可以形成菌落,部分生长较慢的单卵孢株形成肉眼可见的明显菌落所需的时间可能延长。每次做完单孢分离,培养皿仍需用透明胶带封闭,以保持皿内湿度,否则会影响其他卵孢子的继续萌发。
    在进行单孢分离时,应在显微镜下确认移出的小培养基块上只含有一个已萌发了的卵孢子。卵孢子萌发后,它的内部原生质已完全消解,卵孢子壁消解或不易辨认,芽管直接穿过藏卵器壁或从藏卵器的柄处长出,每个萌发的卵孢子可形成1至多根芽管。芽管直接伸长形成菌丝,有的在芽管顶端或其分枝上产生孢子囊。为了清晰辨认萌发了的卵孢子,可以在其形成的小菌落上滴1滴灭菌水,立即在显微镜下观察。大多数卵孢子萌发后,雄器和藏卵器柄仍清晰可见,因此雄器或藏卵器柄是辨别该萌发了的繁殖体是否为卵孢子的主要依据。

    发布时间: 2009-05-11 19:16 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
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