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  • 诱导卵孢子的产生

      
    1.同宗配合疫霉菌卵孢子的产生 对于同宗配合的疫霉菌,通常在适于它们生长的培养基上培养数日,单个菌株即可产生大量卵孢子
    2.异宗配合疫霉菌卵孢子的产生
    (1)直接配对法 将A1和A2交配型菌株按交配型测定所述的方法直接配对培养,在两菌落交界处可产生卵孢子。这种方法的优点是实验操作简单,容易获得数量较大的卵孢子,缺点是在两个不同交配型菌株的菌落交界处出现的卵孢子究竟由哪个配对亲本产生的难以区别。由于不同种的疫霉菌株之间配对时,可以相互诱导对方产生卵孢了,因此在两菌落交界处形成的卵孢子包含两个不同种的菌株产生的卵孢子。如果在疫霉菌的分类、鉴定中需要观察卵孢子的形态,采用直接配对法诱导产生卵孢子时,配对的两个菌株应同属于一个疫霉种。
    (2)聚碳膜间隔配对法 其基本原理是用聚碳膜(直径9cm,孔径0.2um,美国Nuclepore公司主产)将配对菌株间隔开,在聚碳膜两侧的Al和A2交配型配对菌株的菌丝不能穿透聚碳膜,避免了配对菌株菌丝的直接接触,但配对菌株双方产生的性激素可以扩散的方式穿过聚碳膜相互诱导,使膜两侧的菌株各自形成卵孢子。方法是:供试菌株在10%V8或V6培养基上,25°C、黑暗中生长4天,将接种点菌丝块移去,用解剖刀将菌落切成2×2cm大小的菌丝块。移一个交配型的菌丝块1块于灭菌的空培养皿(直径9cm)正中,菌丝面朝上,在菌丝块上覆盖一张灭菌聚碳膜,再移另一交配型菌株的菌丝块置于聚碳膜上方,菌丝面朝下,其位置正好覆在膜下方的菌丝块上。用解剖刀轻压上方菌丝块使上下菌丝块与聚碳膜紧贴。培养皿用双层透明胶带封闭,在20~25°C下、黑暗中培养7天。揭去聚碳膜,在低倍显微镜下观察碳膜上、下两侧菌丝块表面形成的卵孢子
    采用这种方法,在聚碳膜上、下菌丝块表面产生的卵孢子分别为配对菌株各自自交产生的卵孢子,克服了直接配对法的某些缺陷,对疫霉菌的鉴定,遗传研究十分有用,配对时不需要采用同一个种的菌株。但该方法操作起来较麻烦,诱导产生的卵孢子数量通常较直接配对法的要少。
    已知有许多因素影响疫霉菌卵孢子的产生和产生数量。除配对菌株自身的生理特性外,配对菌株间的性亲和性、培养基成份、光照、培养温度等因素均影响卵孢子的产生量。不同菌株配对组合与卵孢子的产生量密切相关,这主要与配对菌株间的性亲和性有关。要获得大量的卵孢子,应选择具有较高亲和性的菌株进行配对。甾醇类物质如谷甾醇,磷脂类物质如卵磷脂,一些氨基酸如色氨酸、天冬氨酸等和钙均有助于提高卵孢子的产生量。光照强烈抑制卵孢子的产生。培养温度对卵孢子产生的影响因不同的疫霉种类而有一定差异,一般而言,略低于疫霉菌菌丝最适生长温度的培养温度有利于卵孢子的产生。

    发布时间: 2009-05-11 19:10 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
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