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  • 游动孢子悬浮液的制备

      
    (一)刺激孢子囊释放游动孢子 成熟的疫霉菌孢子囊通常在适温下可以逐渐释放出游动孢子。但要制备高浓度的游动孢子悬浮液,要求成熟的孢子囊同时大量释放游动孢子。刺激疫霉菌孢子囊释放游动孢子,其方法是将产生有大量孢子囊的菌丝丛或菌丝块挑入盛有10ml左右灭菌自来水的培养皿中,培养皿置于5~10°C冰箱中10~15分钟后,取出置于适温(20~26°C)下10~30分钟,即有大量游动孢子释放。
    (二)游动孢子的计数 有些试验如用游动孢子进行定量接种试验,、,需要计算在一定体积内游动孢子悬浮所含游动孢子的数量。由于游动孢子不断地游动,采用真菌常规孢子记数方法来计算疫霉菌游动孢子悬浮液浓度较为困难,且不准确。一个简便的确定疫霉菌游动孢子悬浮液浓度的方法是:用微量加样器吸取游动孢子悬浮液5ul于干净载玻片上,在排出悬浮液时将加样器吸头朝右侧略拖一下,将悬浮液在载玻片上拖成一条细短的带,共取样5次。在10× 10倍显微镜下计算5个样本中游动孢子的总数,求出5ul悬浮液中游动孢子个数的平均值,按以下公式计算每毫升悬浮液中游动孢子的个数。
    游动孢子悬浮液浓度(个/ml)=5ul悬浮液中游动孢子平均个数×1000
                                                                                       5
    (三)促使游动孢子休止 有些试验要求游动孢子在释放后迅速休止,例如当游动孢子悬浮液浓度偏低时,需要促使游动孢子迅速地全部休止,以便通过离心的方法浓缩游动孢子。促使游动孢子休止的方法是:将游动孢子悬浮液倒入大试管中,将试管在震荡器上激烈震荡2~3分钟,可促使游动孢子鞭毛脱落转变为休止孢。采用这一方法,不会导致游动孢子破裂,又可促使游动孢子在几分钟内休止

    发布时间: 2009-05-11 19:06 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
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