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  • 诱导孢子囊产生

      
    诱导疫霉菌产生大量孢子囊的方法主要有以下5种。
    (一)菌丝丛水培法 将10%V8或V6培养液倒入灭菌培养皿中,每皿(直径9cm)15~20ml。将新鲜培养的疫霉菌菌丝块(大小约2× 2mm)8~10块移入培养液中,在25°C、黑暗条件下培养2~3天。待菌丝丛形成后,倾去培养液,加入15~20ml灭菌自来水重新悬浮菌丝丛,每皿滴加经过滤灭菌的土壤浸出液3~5滴,置于25°C、黑暗中培养。以后每隔12~24小时换一次水并滴加土壤浸出液,直至孢子囊大量产生。
    采用这一方法,大多数疫霉菌通常在换水后36~48小时左右可以产生大量孢子囊。已验证这一方法对诱导多数常见疫霉种的孢子囊产生效果很好,所产生的孢子囊可供疫霉菌分类与种的鉴定用,也可用于制各游动孢子悬浮液。滴加土壤浸出液可以刺激多数疫霉菌产生较多的孢子囊,但对于一些容易产生孢子囊的菌株,在换水后不滴加土壤浸出液对孢子囊的产生量影响不大。土壤浸出液的加入量不能过多,一般每皿控制在3~5滴左右,滴加过多可能导致孢子囊畸形。
    土壤浸出液的制各主要是取肥沃菜园表土500g,加入去离子水500ml,充分搅匀后静置数小时。土壤上清液用普通滤纸过滤后,再经孔径0.22um的滤膜过滤2次除菌。除菌后的滤过液即为所制各的土壤浸出液,置于4°C冰箱中保存各用。
    (二)菌丝块水培法 移在10%V8或V6培养基平板上生长3~7天的疫霉菌丝块(大小约10× 15mm)数块于灭菌自来水中,菌丝块的菌丝面朝上,让灭菌自来水刚刚淹过菌丝面。培养皿置日光灯下连续照光。通常经24~48小时,菌丝块表面可产生大量孢子囊
    (三)皮氏(Petri )培养液法 将新鲜培养的疫霉菌菌丝块数块移入皮氏溶液中,在适温、黑暗条件下培养3~4天,倾去皮氏溶液,换上灭菌蒸馏水,置于光照或黑暗条件直至产生大量孢子囊。
    皮氏溶液的配方是:Ca(NO3)20g,KH2PO4 0.15g,Mg(NO3)20.15g,CaC12 0.06g,蒸馏水1000ml。
    在121°C下高压蒸汽灭菌15~20 分钟。有些疫霉菌在未经灭菌的皮氏溶液中可产生更多的孢子囊。
    (四)平板培养光照法 将在10%V8或V6培养基平板上生长5~7天的疫霉菌培养物置于日光灯下连续光照4~7天,在培养基表面可产生大量孢子囊。这一方法仅适用于孢子囊具乳突的疫霉菌种群中的部分种或菌株。
    (五)菌丝块—土壤溶液法 取肥沃菜园土 50g加自来水200ml,搅拌均匀,静置数小时。上清液用普通滤纸过滤后,将滤过液倒入培养皿中。挑取数块新鲜培养的疫霉菌菌丝块(大小约10× 15mm)于土壤溶液中,菌丝面朝上,使土壤溶液刚刚漫过菌丝块。置光照下适温诱导20~72小时至产生孢子囊。
    这一方法对某些较难诱导产生孢子囊的疫霉种,如樟疫霉效果较好。
    孢子囊的脱落性检测
    孢子囊具乳突的疫霉菌,其孢子囊成熟后通常可以脱落。孢子囊的脱落性与孢子囊脱落后所芾的柄的长度是疫霉菌分类与鉴定的重要依据。检测孢子囊的脱落性与孢囊柄长度的方法是:将产生大量孢子囊的菌丝丛挑入小试管内,加入0.5~1毫升水。将试管底部撞击手掌心10余次,使孢子囊因震荡脱落。吸取1滴孢子囊悬浮液在显微镜下观察孢子囊脱落情况并测量孢囊柄长度。

    发布时间: 2009-05-11 19:05 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
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