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  • 分离

      
    分离疫霉菌的目的是获得疫霉菌的纯培养,是研究疫霉菌和植物疫病的最基本技术。采用分离真菌的常规方法分离疫霉菌不容易成功,主要是由于疫病病组织中常有杂菌如腐霉菌、镰刀菌、丝核菌及某些接合菌混生。这些真菌生长较疫霉菌迅速,抑制了疫霉菌生长或其菌丝将疫霉菌覆盖,因此不易获得疫霉菌纯培养,或分离到的培养物是其他杂菌。此外,病组织中的细菌在培养基上迅速繁殖,也会抑制疫霉菌的生长。因此,要成功地分离到疫霉菌,通常需要采用适合于疫霉菌生长而不适合其他杂菌生长的选择性培养基。
          将新鲜病组织表面用自来水冲洗干净,稍凉干。将病组织切成2× 2mm左右大小,沿培养皿周缘直接置于选择性培养基表面,每皿(直径9cm)6~10块。在适温下培养数日。待菌落形成后,将培养皿底朝上置于低镜显微镜下观察。若分离物的菌丝无隔膜,从菌落边缘移出菌丝块在选择性培养基上转移一代后移入斜面保存,供鉴定用。
          分离疫霉菌要求用新鲜的病组织,因此在标本采集后应注意保湿并尽早分离。如病组织变干,多离效果不好,可将病组织在自来水龙头下用缓慢流水冲漂24~48小时后再做分离。分离疫霉菌不必像分离其他真菌那样进行表面消毒,但通常需要采用选择性培养基才能达到理想的分离效果。分离时,应选择病健交界组织和病斑中部的组织同时分离。对根腐病、茎腐病,可选择发病细根或根、茎内部木质部组织分离;对果腐病,以剖开病果,挑取内部病组织分离最好。待选择性培养基平板上的病组织块四周长出菌丝形成肉眼可见的菌落后,在显微镜下直接观察,培养基内的疫霉菌菌丝无隔膜,较粗壮、多分枝、主干不明显,通常清晰可见。据此可初步判断识别分离物是否为疫霉菌,此方法比较简便、可靠。

    发布时间: 2009-05-11 19:02 浏览次数:   【 打 印 】【 关 闭
     
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